红豆杉TbAP2基因荧光定量PCR体系的建立及优化

作     者：张恺恺 吕星 杨立莹 陈段芬 邱德有 杨艳芳 ZHANG Kai-kai;LV Xing;YANG Li-ying;CHEN Duan-fen;QIU De-you;YANG Yan-fang

作者机构：中国林业科学研究院林业研究所林木遗传育种国家重点实验室国家林业和草原局林木培育重点实验室北京100091 河北农业大学园艺学院河北保定071001 

基　　金：国家自然科学基金项目(31570675 31670676) 中国林业科学研究院基本科研业务费专项资金(CAFYBB2014QB001) 

出 版 物：《林业科学研究》 (Forest Research)

年 卷 期：2019年第32卷第1期

页      码：39-46页

摘      要：[目的]建立稳定可靠的、适合检测红豆杉(Taxus L.)TbAP2基因表达量的荧光定量PCR实验体系。对于检测该物种中基因的组织特异性表达具有重要意义。[方法]以曼地亚红豆杉细胞为试材,提取总RNA并反转录为cDNA,根据TbAP2基因序列设计多对引物,合成内参基因TBC41的引物,采用正交试验L_9(3~4)方法分别筛选以上2个基因5μL和10μL小反应体系及20μL常用体系中的最佳组合,并通过cDNA模板用量和引物用量等方面进行优化,以确保基因扩增效率在90%～105%之间。[结果]本研究建立了TBC41和TbAP2基因在5、10、20μL体系下的荧光定量最佳PCR反应体系,在优化后的5μL体系下,加入Mix(2×) Universal 2.5μL,cDNA模板1.0μL,正反引物共1.5μL,内参基因TBC41和目的基因TbAP2的扩增效率均为94%;在优化后的10μL下,加入Mix(2×) Universal 5μL,cDNA模板1.2μL,正反引物共1.3μL,TBC41和TbAP2的扩增效率分别为95%和94%。在优化后的20μL下,加入Mix(2×) Universal 10μL,cDNA模板0.5μL,正反引物共1.5μL,TBC41和TbAP2的扩增效率分别为93%和99%,以上各扩增体系回归系数R^2均大于0.980。[结论]在以上3种反应体系下,内参基因和目的基因均具有接近100%的扩增效率,表明本研究成功建立了适合检测红豆杉TbAP2基因表达量的荧光定量PCR实验体系,并为红豆杉其它基因的表达研究提供参考。

主 题 词：红豆杉 AP2 正交试验 实时荧光定量PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090701[090701] 0907[农学-草药学] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.13275/j.cnki.lykxyj.2019.01.006

馆 藏 号：203573046...