DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡

作     者：张海涛 朱振宇 吉琼梅 李秀英 李民友 马涧泉 梁念慈 

作者机构：中山大学中山医学院生化教研室广东广州510089 广东医学院生化教研室广东湛江524023 

基　　金：国家教委留学回国人员启动基金资助项目[2 0 0 0 ] 4 79 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2004年第20卷第1期

页      码：88-93页

摘      要：目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DAPK1转染到Raji细胞 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察细胞凋亡 ,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果 :DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T ,测序鉴定 ;分析结果显示 ,从K562细胞成功扩增 43 0 0bp的DAPK1基因ORF有 7处突变 ,其中 6处是同义突变 ,1处是基因的单链核苷酸多态性 ;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,转化到Raji细胞 ;转染 48h后 ,可以检测到DAPK1的表达 ,并可以观察到细胞发生凋亡。结论 :大片段的基因可以采用RT -PCR法直接克隆 ,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞 ;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF 。

主 题 词：死亡相关蛋白激酶 细胞凋亡 甲基化 Raji细胞 K562细胞 DAPKl基因 开放读码序列 基因克隆 序列分析 抑癌基因 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2004.01.020

馆 藏 号：203573561...