超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定

作     者：宋宏萍 隋延仿 叶菁 李增山 陈广生 张秀敏 

作者机构：第四军医大学基础部病理学教研室陕西西安710032 

基　　金：国家自然科学基金 (39770 82 7) 全军医药卫生科研基金 (0 1Z0 84)重点资助项目 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2004年第20卷第5期

页      码：357-360页

摘      要：目的　构建SEA(D2 2 7A)基因的原核表达载体 ,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法　采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因 ,通过下游引物上的点突变 ,使SEA基因第 6 80位碱基由A突变为C ,致使SEA成熟蛋白的第 2 2 7位氨基酸残基由天冬氨酸 (GAT)突变为丙氨酸 (GCT) ,构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,在大肠杆菌DH5α中原核表达 ,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定。结果　构建的SEA(D2 2 7A)基因经测序证实与设计的序列一致 ;成功地构建pGEX SEA(D2 2 7A)重组表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌DH5α ,通过IPTG诱导、GSTrapFF柱分离纯化及凝血酶切除GST后 ,得到Mr 为 2 70 0 0的目的蛋白。淋巴细胞增殖实验显示 ,10 0ng mL重组SEA(D2 2 7A)可明显刺激淋巴细胞增殖。结论　成功地构建了SEA(D2 2 7A)基因原核表达载体 ,并在大肠杆菌中得到高效表达 ,所得重组SEA(D2 2 7A)能够刺激淋巴细胞增殖 ,但作用与野生型SEA相比较温和。该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索。

主 题 词：葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 点突变 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-8861.2004.05.008

馆 藏 号：203577652...