利用定点突变技术构建突变nm23-H_1和EGFP融合基因

作     者：朱大兴 周清华 王艳萍 朱文 陈小禾 孙芝琳 ZHU Daxing;ZHOU Qinghua;WANG Yanping;ZHU Wen;CHEN Xiaohe;SUN Zhilin

作者机构：四川大学华西医院四川省肺癌分子重点实验室成都610041 

基　　金：国家自然科学基金重点项目(No.30430300) 教育部高等学校博士学科点专项基金(No.20040610060)资助 

出 版 物：《中国肺癌杂志》 (Chinese Journal of Lung Cancer)

年 卷 期：2006年第9卷第2期

页      码：117-122页

摘      要：背景与目的以前的研究已经证明nm23H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚。基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质。本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23H1增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据。方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23H1EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23H1P96S、nm23H1H118F、nm23H1S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23H1P96SS120G,构建了突变型nm23H1EGFP融合基因。结果成功构建了nm23H1S44AEGFP、nm23H1P96SEGFP、nm23H1H118FEGFP、nm23H1S120GEGFP、nm23H1P96SS120GEGFP五个突变型nm23H1EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致。结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23H1EGFP融合基因。QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法。

主 题 词：定点突变 nm23-H1 EGFP 突变型nm23-H1-GFP融合基因 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3779/cjlc.v9i2.2159

馆 藏 号：203578262...