人p27^(kip1)基因的克隆及其真核表达载体的构建

作     者：吴芃 郑少斌 谭万龙 左翼 WU Peng;ZHENG Shao-bin;TAN Wan-long;ZUO Yi

作者机构：南方医科大学南方医院泌尿外科广州510515 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2008年第8卷第4期

页      码：285-287,305页

摘      要：目的克隆人p27kip1基因并构建其真核表达载体,为进一步研究其功能奠定基础。方法根据p27kip1已知序列设计引物,分别在上下游引入MluⅠ和SpeⅠ酶切位点,从人肾脏组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,亚克隆入携带GFP报告基因的pWPXL真核载体中,经筛选获得正确的克隆,并通过双酶切凝胶电泳及测序鉴定。将成功构建的质粒在脂质体介导下转染肾癌786-0细胞,并通过RT-PCR及Western-blot检测表达情况。结果克隆了人p27kip1基因,与GenBank中序列比对无误;真核表达载体经酶切鉴定表明为正确重组子,成功构建了真核表达载体。转染肾癌786-0细胞48h后,p27kip1蛋白出现高表达。结论成功克隆了p27kip1基因,构建了其真核表达载体并在肾癌细胞中成功表达,为p27kip1在肾肿瘤中的进一步研究提供了工作基础。

主 题 词：p27^kip1 基因表达 分子克隆 人 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-3619.2008.04.001

馆 藏 号：203578875...