实时荧光定量RT-PCR检测剑尾鱼IgM mRNA方法的建立

作     者：张铃铃 任艳 石存斌 吴淑勤 

作者机构：大连水产学院生命科学与技术学院辽宁大连116023 中国水产科学研究院珠江水产研究所广东广州510380 

基　　金：农业公益性行业科研专项(200803013) 

出 版 物：《大连水产学院学报》 (Journal of Dalian Fisheries University)

年 卷 期：2010年第25卷第2期

页      码：172-177页

摘      要：根据剑尾鱼Xiphophorus helleri IgM和β-actin基因序列,分别在保守区域设计并合成引物,从注射免疫后的剑尾鱼头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得标准品质粒以10倍梯度进行稀释,采用SYBR Green I染料进行荧光定量扩增,构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明：构建的剑尾鱼IgM和β-actin基因的标准品Ct值检测范围分别为7~21和8~25,扩增效率分别为2.025、1.970;融解曲线分析结果显示具有特异的单个峰,其Tm值分别为82.43℃、86.09℃,表明扩增产物特异性非常好。本实验中建立的剑尾鱼IgM基因实时荧光定量PCR方法可用于对剑尾鱼IgM基因的转录水平进行测定。

主 题 词：剑尾鱼 IgM基因 实时荧光定量PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-9957.2010.02.015

馆 藏 号：203579727...