联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析

作     者：刘静 吴瑜 詹希美 冯崑尧 甘明 张美春 郑小英 李卓雅 何蔼 LIU Jing;WU Yu;ZHAN Xi-mei;FENG Kun-yao;GAN Ming;ZHANG Mei-chun;ZHENG Xiao-ying;LI Zhuo-ya;HE Ai

作者机构：中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510080 中山大学热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(30800110) 教育部博士点新教师基金(200805581108) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2011年第11卷第5期

页      码：500-504页

摘      要：目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列。生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性最高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族。结论联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确。为进一步对其进行功能的研究奠定了基础。

主 题 词：巢式PCR 3’RACE 白纹伊蚊 漆酶型酚氧化酶 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 081704[081704] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-轻工类] 

馆 藏 号：203580199...