人抗凝血酶Cys248位点突变体的构建与真核表达

作     者：杨海 王芳宇 李青旺 胡建宏 董潇潇 单永红 YANG Hai;WANG Fang-yu;LI Qing-wang;HU Jian-hong;Dong Xiao-xiao;SHAN Yong-hong

作者机构：衡阳师范学院生命科学系湖南衡阳421008 西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 南岳生物制药有限公司产品研发部湖南衡阳421002 

基　　金：湖南省自然科学基金-衡阳联合基金项目(13JJ8021) 衡阳市科技计划一般项目(2012KN24) 衡阳师范学院产学研用一般项目(12CXYY07) 衡阳师范学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目(CXZX1307) 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2013年第41卷第10期

页      码：32-36页

摘      要：【目的】建立一种对人抗凝血酶(AT)Cys248位点进行定点突变和真核表达的可靠方法,为突变体的结构和功能研究提供原始材料。【方法】以人AT cDNA序列为模板,设计1对反向扩增引物,进行反向PCR反应;PCR产物经连接、测序后,克隆至表达质粒pcDNA3.1(+)-GFP上,构建重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-mATGFP;用重组载体介导突变基因在山羊乳腺上皮(GME)细胞内表达,收集细胞培养上清液进行表达产物的定性、定量检测。【结果】突变基因经测序证实与预期结果一致,且在GME细胞内得到高效表达,细胞培养液上清中的突变体质量浓度为(526±17.3)mg/L。【结论】反向PCR法是对AT基因进行定点突变的可靠方法,AT突变基因在GME细胞内可高效表达。

主 题 词：反向PCR 人抗凝血酶 Cys248 定点突变 真核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13207/j.cnki.jnwafu.2013.10.001

馆 藏 号：203581345...