绵羊精子赤道膜蛋白片段1(SPESP1)的克隆、原核表达及纯化

作     者：马媛媛 程飞跃 邢万金 Ma Yuanyuan;Cheng Feiyue;Xing Wanjin

作者机构：内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 

基　　金：国家自然科学基金项目(31460600) 内蒙古高等学校科学研究项目(NJZZ14001) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2015年第31卷第7期

页      码：155-160页

摘      要：旨在克隆绵羊Spesp1 c DNA并表达,得到纯化的GST-SPESP1融合蛋白。以绵羊睾丸组织总c DNA为模板,根据Gen Bank公布的绵羊基因组序列设计引物,PCR扩增得到Spesp1 c DNA,构建原核表达重组载体p GEX-Spesp1,将其转化到***21中表达,并优化其表达条件,利用SDS-PAGE切胶纯化法得到纯化的融合蛋白,用Western blot鉴定所得融合蛋白。结果表明,经测序,克隆得到的Spesp1 c DNA序列与Gen Bank中预测的c DNA序列对比有两个碱基不同,并造成一个氨基酸的差异。在***21中成功表达重组融合蛋白,其最优表达条件为:37℃、4 h、0.005%IPTG终浓度,SDS-PAGE和Western blotting中,融合蛋白位于约64 k D处并可以被抗GST和抗羊SPESP1的抗体识别,与预计相符,表明融合蛋白成功表达。成功纯化得到GST-SPESP1融合蛋白,为研究SPESP1在精卵细胞膜融合中的功能奠定了基础。

主 题 词：绵羊 SPESP1 cDNA克隆 原核表达 蛋白纯化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.07.023

馆 藏 号：203582241...