鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因的克隆、表达、纯化及免疫学鉴定

作     者：吴序栎 杨志华 刘志刚 吴海强 WU Xu-li;YANG Zhi-hua;LIU Zhi-gang;WU Hai-qiang

作者机构：深圳大学过敏反应与免疫学研究所广东深圳518060 

基　　金：国家"863"计划项目(2006AA100308) 广东省科技重点专项项目(2003A3080502) 深圳市科技计划项目(200326) 深圳大学校科研基金项目(200712) 

出 版 物：《食品科学》 (Food Science)

年 卷 期：2009年第30卷第1期

页      码：142-146页

摘      要：目的:克隆表达鸡蛋主要过敏原Gal d 3基因并检验其免疫活性。方法:提取鸡蛋的总RNA,采用RT- PCR方法扩增出目的基因片段,将其克隆入T载体中进行测序和分析。设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT- PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a中进行诱导表达。通过Ni^(2+)亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western blotting)方法检测其IgE结合活性。结果:克隆获得了鸡蛋主要过敏原Gal d 3。基因开放阅读框为2118个碱基(包括终止密码子),编码705个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.5,相对分子质量约为76000。表达产物经亲和层析纯化,用Western blotting方法检测免疫学活性,目的蛋白具有良好的免疫原性。结论:成功地克隆和表达了鸡蛋主要变应原Gal d 3基因,该蛋白具有良好的免疫原性。

主 题 词：鸡蛋 过敏原 基因克隆 表达 Gald3 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1002-6630.2009.01.034

馆 藏 号：203588106...