华支睾吸虫乙醛脱氢酶基因的克隆、表达和序列分析

作     者：吴德 吴忠道 徐进 何东苟 余新炳 WU De;WU Zhong-Dao;XU Jin;HE Dong-gou;YU Xin-Bing

作者机构：中山大学中山医学院病原生物学部广东广州510080 

基　　金：广东省医学联合科技攻关基金资助项目(2002B31005) 广东省科技厅社会发展攻关基金资助项目(2002B31005) 广州市科技攻关基金资助项目(200223-E4022) 

出 版 物：《中山大学学报（医学科学版）》 (Journal of Sun Yat-Sen University:Medical Sciences)

年 卷 期：2005年第26卷第3期

页      码：241-244,249页

摘      要：【目的】通过筛选华支睾吸虫成虫cDNA质粒文库,发现并识别新基因,将发现的新基因编码区克隆到原核表达质粒pGEX鄄4T鄄1并表达出融合蛋白。【方法】用文库通用引物对华支睾吸虫cDNA质粒文库进行PCR扩增,对产物为500bp以上的质粒测序,结果在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,并应用ORFfind、ClustalW、NCBIConservedDomainSearch等程序对其进行开放阅读框(ORF)、进化树及结构域分析。根据载体多克隆位点及新基因ORF设计引物,PCR扩增,产物克隆到目的载体上。筛选并鉴定出阳性克隆,对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS鄄PAGE电泳鉴定。【结果】发现CsALDH基因,完整阅读框含1467个碱基,编码489个氨基酸,理论相对分子质量Mr≈52.564×103,理论pI为5.43。序列分析表明,CsALDH基因编码的氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,CsALDH与爪蛙属乙醛脱氢酶的同源性为59%,具有乙醛脱氢酶保守功能域。构建的重组原核表达质粒经鉴定与目标基因相符。电泳显示表达产物在Mr≈78×103处有一条特异性条带。【结论】发现华支睾吸虫磷酸甘油醛脱氢酶基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

主 题 词：华支睾吸虫 乙醛脱氨酶 分子克隆 原核表达 序列分析 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1672-3554.2005.03.001

馆 藏 号：203589215...