腺病毒介导siRNA抑制人胃腺癌细胞VEGF表达

作     者：褚衍六 赵幼安 顾晓萌 宋现让 杨艳 CHU Yan-liu;ZHAO You-an;GU Xiao-meng;SONG Xian-rang;YANG Yan

作者机构：山东大学齐鲁医院消化科山东济南250012 山东省肿瘤医院基础研究中心山东济南250117 山东省科学院中日友好生物技术研究中心山东济南250014 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2006年第44卷第2期

页      码：161-165页

摘      要：目的:构建重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF并观察其抑制人胃腺癌细胞(MGC-803)血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的效果。方法:①选择针对人VEGFmRNA的特异性siRNA靶序列,设计、合成其相应的双链DNA,插入pSUPER质粒,得到psiRNA-VEGF;NotⅠ和XhoⅠ双酶切psiRNA-VEGF得siRNA-VEGF表达片段;插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack,构建pAdTrack-siR-NA-VEGF,后者与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组后,酶切鉴定、293细胞包装、扩增,得到重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF;②Ad-siRNA-VEGF转染MGC-803细胞96h后,RealTimePCR检测细胞VEGFmRNA水平、ELISA测定细胞培养液上清VEGF蛋白浓度。结果:成功构建重组腺病毒Ad-siRNA-VEGF,293细胞包装1d后观察到绿色荧光蛋白表达,氯化铯梯度离心纯化获得约3.6×108efu/ml滴度的重组腺病毒;Ad-siRNA-VEGF转染MGC-803细胞96h后,其VEGFmRNA水平下降了67.1%,培养液上清VEGF蛋白浓度下降了72.5%(P<0.01)。结论:腺病毒介导的RNAi技术可显著抑制人胃腺癌细胞的VEGF表达,这为抗血管生成治疗肿瘤的进一步研究开辟了新的方向。

主 题 词：胃肿瘤 RNA干扰 腺病毒 表皮生长因子 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7554.2006.02.013

馆 藏 号：203593569...