干扰AFP蛋白表达的shRNA表达载体的构建及活性鉴定

作     者：张国英 刘明社 赵中夫 张芸 杨慧 武延隽 

作者机构：长治医学院肝病研究所046000 山西医科大学 

基　　金：山西省教育厅技术开发基金项目(200611036) 山西省自然科学基金项目(20051114) 

出 版 物：《长治医学院学报》 (Journal of Changzhi Medical College)

年 卷 期：2007年第21卷第5期

页      码：324-327页

摘      要：目的:利用含报告基因EGFP的pGenesil-1质粒构建干扰AFP蛋白表达的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)表达的载体,并进行活性鉴定。方法:设计表达短发夹RNA的互补DNA序列,经退火成双链,克隆至带有U6启动子的质粒载体pGenesil-1中,构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,扩增,提取质粒,酶切鉴定后测序分析。构建正确的重组质粒经脂质体转染HepG2细胞,检测转染率和培养细胞上清的AFP含量变化,确定重组质粒的活性。结果:构建了靶向AFP蛋白的2个shRNA重组质粒载体pGenesil-1-siAFP1和pGenesil-1-siAFP2。酶切鉴定和测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。重组质粒有效转染HepG2细胞并显著抑制AFP表达。结论:成功构建具有活性的、能够表达shRNA靶向干扰AFP蛋白的2个重组质粒载体。

主 题 词：AFP蛋白 RNAi shRNA 重组质粒载体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-0588.2007.05.002

馆 藏 号：203594058...