致病性钩端螺旋体TaqMan Real-timePCR检测技术的建立及其应用

作     者：张翠彩 李秀文 聂一新 杨会棉 蒋秀高 ZHANG Cui-cai;LI Xiu-wen;NIE Yi-xin;YANG Hui-mian;JIANG Xiu-gao

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所钩端螺旋体病室北京102206 

基　　金：国家科技重大专项(2008ZX 10004-002 2008ZX 10004-008) This work was supported by grants from the National Science and Technology Mega-Projects of China (No.2008ZX 10004-002 2008ZX10004-008) 

出 版 物：《中华流行病学杂志》 (Chinese Journal of Epidemiology)

年 卷 期：2011年第32卷第10期

页      码：1018-1021页

摘      要：目的建立致病性钩端螺旋体（钩体）TaqManReal-timePCR检测技术。方法以钩体16SrRNA基因的部分片段rrs基因作为靶基因，设计引物、TaqMan探针，PCR产物克隆到pMDl9-T载体，制作标准曲线，建立定量分析质控标准。利用中国15群15型致病性钩体参考菌株、16群21型非致病性钩体参考菌株、50株不同血清群致病性分离株及伯氏疏螺旋体、嗜肺军团菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌等27株其他常见致病菌检验引物、探针的灵敏性、特异性。将Real-timePCR、普通PCR同时应用于倍比稀释致病性钩体染色体DNA及25份现场鼠肾标本的检测。结果建立、优化致病性钩体Real-time PCR技术，致病性钩体扩增荧光信号阳性，非致病性钩体及其他非钩体菌均无扩增。对于倍比稀释的质粒标准品，Real-timePCR和普通PCR的最低检测下限分别是10copy／μl和10。copy／μl。对于倍比稀释的钩体染色体DNA，两者的最低检测下限分别为：100fg／μl和1ng／μl。25份现场鼠肾标本检测显示，两种方法的检测结果一致。结论以rrs为靶基因建立的Real-timePCR技术，具有较高的灵敏度和特异度，可用于致病性钩体的病原学检测。

主 题 词：钩端螺旋体 TaqMan Real-time PCR 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2011.10.015

馆 藏 号：203595654...