SiRNA干扰对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞Toll样受体4／转接子髓分化因子88信号通路的影响

作     者：吕金雷 杨玉娟 吕柳青 王瑜 杨柳 陈钦开 时军 LV Jin-lei;YANG Yu-Juan;LV Liu-qing;WANG Yu;YANG Liu;CHEN Qin-kai;SHI Jun

作者机构：南昌大学附属第一医院肾内科330006 南昌大学附属第一医院移植科330006 湖北省黄石市二医院 

基　　金：国家自然科学基金项目(81060063) 江西省教育厅科学基金项目(JJJ11354) 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2013年第29卷第11期

页      码：837-841页

摘      要：目的通过siRNA（RNAi）干扰选择性下调TLR4基因的表达，探讨高糖对大鼠肾小管上皮细胞（NRK．52E）T0ll样受体4（toll－like receptor4，TLR4）及其转接子髓分化因子88（myeloid differentiation factor88，MyD88）和炎性因子分泌的影响。方法设计并合成3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段，以带有红色荧光的BLOCK—ITAlexaFluor作为阴性对照，荧光显微镜下观察细胞转染效率，实时定量PCR检测TLR4mRNA的表达变化。挑选基因沉默效率最佳的siRNA用于进一步实验，细胞被分5组：（1）正常糖对照组（NG）；（2）高糖组（HG）；（3）HG＋血管紧张素Ⅱ（AngII）＋空转组；（4）HG＋AngⅡ＋siRNA组；（5）HG＋AngⅡ＋厄贝沙坦（IrB）组。采用实时定量PCR法检测TLR4、MyD88mRNA的表达，Western印迹检测TLR4、MyD88及核因子kappaB（NF-kB）蛋白表达；ELISA法检测巨噬细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素6（IL-6）的表达。结果与NG组比较，高糖组TLR4／MyD88mRNA及TLR4、MyD88、NF-kB蛋白表达水平明显上调（均P〈0．01），细胞上清MCP-1、IL-6水平亦升高（P〈0．01）；空转组与高糖组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；SiRNA组、ARB组TLR4、MyD88mRNA明显下调，TLR4、MyD88及NF-kB蛋白明显下调，MCP-1、IL-6表达亦下调（均P〈0．01）。结论高糖上调小管上皮细胞TLR4／MyD88信号及炎性细胞因子表达，Ang11可增强此效应；特异性基因沉默可阻断由高糖及AngII诱导的TLR4信号通路的激活，并下调炎性介质的释放；TLR4信号通路在高糖、高肾素环境肾小管上皮细胞炎性反应机制中发挥关键作用。

主 题 词：高糖 血管紧张素Ⅱ 小干扰RNA TLR4信号 细胞因子 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-7097.2013.11.008

馆 藏 号：203596742...