产气荚膜梭菌α毒素的原核表达及纯化

作     者：于佳 张国利 陈萍 田园 岳玉环 吴广谋 何苗 史飞 孙诗雯 

作者机构：吉林农业大学食品科学与工程学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林省人兽共患预防与控制重点实验室省部共建重点实验室吉林长春130122 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2014年第27卷第10期

页      码：1258-1262页

摘      要：目的克隆产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin,CPA)全基因,在大肠埃希菌(***)中表达并纯化α毒素。方法设计并合成CPA的全基因,插入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28aCPA,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达,优化表达条件,并对重组蛋白进行纯化。结果双酶切和测序鉴定结果表明,CPA基因以正确的阅读框架克隆入pET-28a载体中;表达的重组蛋白相对分子质量约为43 000,主要以可溶性形式表达,最佳培养基为TB培养基,最佳诱导温度为37℃,诱导时间为3 h;纯化的重组蛋白纯度达95%以上,浓度为0.663 mg/ml,收率为5 mg/g湿菌。结论成功在***中表达了CPA,纯化后的CPA纯度较高,为进一步研究其结构、功能、致病机制及制备抗α毒素人源单链抗体奠定了基础。

主 题 词：产气荚膜梭菌α毒素 基因克隆 原核细胞 基因表达 纯化 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.000607

馆 藏 号：203597293...