正交设计优化假俭草SRAP-PCR反应体系及引物筛选

作     者：郑轶琦 王志勇 郭海林 薛丹丹 刘建秀 ZHENG Yi-qi;WANG Zhi-yong;GUO Hai-lin;XUE Dan-dan;LIU Jian-xiu

作者机构：南京农业大学园艺学院江苏南京210095 江苏省中国科学院植物研究所南京中山植物园江苏南京210014 

基　　金：国家自然科学基金(30670200)资助 

出 版 物：《草业学报》 (Acta Prataculturae Sinica)

年 卷 期：2008年第17卷第4期

页      码：110-117页

摘      要：以假俭草叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg2+、dNTP、引物和Taq DNA聚合酶4种因素3个水平,对假俭草SRAP反应体系进行研究,并比较了不同浓度模板DNA对扩增效果的影响,建立了假俭草的SRAP最佳反应体系。结果表明,假俭草SRAP-PCR最佳反应体系为:2μL 10×PCR buffer、60 ng模板DNA、Mg2+1.50 mmol/L、dNTP 260μmol/L、引物0.25μmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U,总体积为20μL。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以Mg2+浓度影响最大,Taq DNA聚合酶的影响最小。运用该体系对4份假俭草种源进行验证,证明该体系稳定可靠,并从45个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的26个引物组合。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP标记技术进行假俭草分子遗传学研究提供了科学依据。

主 题 词：假俭草 SRAP标记 正交试验设计 体系优化 引物筛选 

学科分类：090706[090706] 0907[农学-草药学] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1004-5759.2008.04.015

馆 藏 号：203601834...