一种质粒介导的RNAi系统的建立

作     者：何承伟 刘芳 张月飞 剧克元 

作者机构：广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江，广东524023 广东医学院第一附属医院耳鼻喉科，湛江，广东524023 

基　　金：ThisworkwassupportedbygrantsfromtheNaturalScienceFoundationofGuangdongProvince(No.31962) theSpecialFundsforMajorResearchProgramofGuangdongProvince(No.ZKM04205S)andtheSpecialFundsforMajorSubjectProgramofGuangdongProvi 

出 版 物：《世界肿瘤杂志》 (Tumour Journal of the World)

年 卷 期：2004年第3卷第4期

页      码：312-317页

摘      要：目的 构建mU6启动子驱动的，在真核细胞内表达短发夹状RNA(short hairpin RNA，shRNA)的质粒载体；以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)为靶点观察该载体介导的RNAi效应。方法 从已知质粒中获取mU6启动子，经亚克隆后替换pcDNA3质粒中的CMV启动子，构建成pmU6质粒；设计并构建能表达针对GFP的shRNA的重组质粒，与表达GFP的质粒共转染细胞，用流式细胞仪检测GFP的表达水平。结果 表达shRNA的pmU6质粒载体转染细胞后抑制了细胞中GFP的表达，针对GFP基因不同位点的shRNA的RNAi效应差异很大。结论 pmU6质粒载体能介导RNAi效应，该载体可作为RNAi用于基因功能和基因治疗研究的有用工具。

主 题 词：RNA 表达 质粒载体 质粒介导 启动子 共转染 流式细胞仪检测 靶点 GFP 基因治疗 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100103[100103] 10[医学] 

馆 藏 号：203605143...