序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达

作     者：高福兰 齐家龙 舒聪妍 谢航航 黄惟巍 刘存宝 杨旭 孙文佳 白红妹 马雁冰 GAO Fu-lan;QI Jia-long;SHU Cong-yan;XIE Hang-hang;HUANG Wei-wei;LIU Cun-bao;YANG Xu;SUN Wen-jia;BAI Hong-mei;MA Yan-bing

作者机构：昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81773270) 云南省应用基础研究重点项目(2016FA049)资助 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2019年第39卷第3期

页      码：46-55页

摘      要：目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的m IL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的m IL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒p Bud CE4. 1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的m IL-33刺激巨噬细胞Raw264. 7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高; Western blot和ELISA结果显示密码子优化的m IL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下m IL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导m IL-33的分泌,产物具生物学活性。结论:密码子优化操作显著改善了m IL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础。

主 题 词：序列优化 白细胞介素-33成熟肽(mIL-33) 293FT 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20190307

馆 藏 号：203607351...