美国白蛾氨肽酶N的基因克隆表达及与苏云金杆菌3种毒素蛋白的结合特性分析

作     者：刘子欢 赵丹 常梦颖 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍 Liu Zihuan;Zhao Dan;Chang Mengying;Zhang Yakun;Xu Chang;Lu Xiujun;Guo Wei

作者机构：河北农业大学植物保护学院河北保定071001 黄骅港海关河北沧州061113 河北省核桃工程技术研究中心河北保定071001 

基　　金：国家现代农业产业技术体系建设专项(No.CARS-13) 河北省自然科学基金项目(No.C2017204072) 河北省山区核桃近自然生产技术创新与示范项目(No.16236810D) 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2019年第45卷第1期

页      码：24-31页

摘      要：美国白蛾(Hyphantria cunea)是桑树的重要害虫。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis)杀虫晶体蛋白对该虫的作用机制,利用已知昆虫氨肽酶N基因序列设计引物,以美国白蛾中肠cDNA为模板,利用RACE-PCR技术获得美国白蛾中肠氨肽酶N基因hcapn1全长序列(GenBank登录号:KP053647)。该基因开放阅读框为3 000 bp,编码999个氨基酸,预测蛋白质的分子质量和等电点分别为113.14 kD和4.85。设计去信号肽引物PCR扩增获得hcapn1基因序列,构建原核重组表达载体pET30a-hcapn1,诱导表达的HcAPN1重组蛋白约110 kD。将苏云金杆菌Cry1Ac、Cry2Ab33和Cry9Ea6原毒素经胰蛋白酶消化后与HcAPN1重组蛋白分别进行体外配体印迹试验,发现HcAPN1重组蛋白与Cry9Ea6结合,而不与Cry2Ab33、Cry1Ac发生特异结合,推测HcAPN1可能为Cry9Ea6在美国白蛾中肠的受体蛋白。分别设计引物扩增HcAPN1蛋白2个结构域Asp_(34)～Asp_( 527)和Leu_(563)～Gln_(925)的编码序列,在大肠埃希菌中表达获得62 kD和48 kD 2种重组蛋白,体外结合试验显示Cry9Ea6与HcAPN1的结合发生在Leu_(563)～Gln_(925)之间。研究结果为深入理解苏云金杆菌Cry9Ea6蛋白对美国白蛾的杀虫机制提供了基础数据。

主 题 词：美国白蛾 氨肽酶N Bt蛋白 配体印迹 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0904[农学-动物医学类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13441/j.cnki.cykx.2019.01.004

馆 藏 号：203607450...