转录因子E2F-1 siRNA表达质粒的构建及对胃癌MGC803细胞的沉默效应

作     者：尹永硕 肖强 谢玉波 李雷 王长青 唐振勇 马玉林 崔建华 

作者机构：广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科南宁530021 广西医科大学第一附属医院麻醉科南宁530021 

基　　金：广西自然科学基金项目(桂科自0640085) 广西医疗卫生重点科研课题(重200625) 

出 版 物：《广西医学院学报》 (JOURNAL OF GUANGXI MEDICAL UNIVERSITY)

年 卷 期：2008年第18卷第2期

页      码：175-178页

摘      要：目的:通过构建人E2F-1基因的小干扰RNA(siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1基因表达的影响。方法:将设计合成的具有短发夹结构的人E2F-1基因siRNA寡核苷酸链退火形成双链,连接入经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后的pSilencer4·1-CMVneo表达质粒,并做酶切及测序鉴定。用脂质体把重组质粒转染至细胞,采用实时定量PCR(real-time quantitativePCR)及蛋白印迹(western blotting)技术分别检测E2F-1mRNA及蛋白表达。结果:经酶切及测序鉴定,成功构建了E2F-1 siRNA表达质粒;它可显著抑制MGC803细胞中E2F-1基因mRNA及蛋白表达,与未转染组及阴性对照组细胞比较,分别降低了86·4%、86·1%和81·5%、79·6%。结论:pSilencer4·1-E2F-1重组质粒能抑制人胃癌MGC803细胞E2F-1基因的表达,为进一步E2F-1基因的功能研究及胃癌治疗研究提供了实验基础。

主 题 词：RNA干扰 胃癌MGC803细胞 E2F-1 重组表达质粒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-930X.2008.02.004

馆 藏 号：203607878...