腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1基因表达

作     者：刘雄 李湘平 彭英 李刚 张宝 李晓华 周立辉 LIU Xiong;LI Xiangping;PENG Ying;LI Gang;ZHANG Bao;LI Xiaohua;ZHOU Lihui

作者机构：广州市南方医科大学南方医院耳鼻咽喉科广东广州510515 广州中山大学第二附属医院神经内科广东广州510515 广州市南方医科大学分子生物教研室广东广州510515 南昌解放军第九四医院耳鼻咽喉科江西南昌330002 

基　　金：国家自然科学基金(30471945) 广东省科技计划公关项目(2003C30303) 

出 版 物：《中国耳鼻咽喉头颈外科》 (Chinese Archives of Otolaryngology-Head and Neck Surgery)

年 卷 期：2006年第13卷第11期

页      码：762-765页

摘      要：目的构建针对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）潜伏膜蛋白1（latent membrane protein1，LMP-1）的特异性发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）干扰序列的重组腺相关病毒（recombinant adeno—associated virus，rAAV）载体（rAAV-shRNA—LMP-1），介导其体外表达并鉴定其生物活性。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性shRNA干扰序列，采用分子克隆的方法，将干扰序列及U6启动子插入pAAV-2质粒中，采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-shRNA-LMP-1，测定其滴度及感染效率，RT-PCR鉴定目的基因的抑制效率。结果以rAAV-EGFP5×10^4v．g（virus genome，病毒基因组数）／细胞转染C666-1细胞，转染效率大干95％，PT—PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×10^4v．g／细胞转染C666—1后目的基因抑制效率大于90％。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达，为进-步研究肿瘤基因治疗，尤其是动物实验奠定了基础。

主 题 词：疱疹病毒4型,人 RNA干扰 鼻咽肿瘤 基因,肿瘤抑制 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-7002.2006.11.008

馆 藏 号：203609222...