利用Red同源重组系统构建兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因打靶载体

作     者：张传山 李峰 姚刚 郭毅 鲍柳君 陈学进 ZHANG Chuan-shan;LI Feng;YAO Gang;Guo Yi;BAO Liu-Jun;CHEN Xue-jin

作者机构：新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所上海200092 上海交通大学医学院实验动物科学部上海200025 苏州大学生命科学学院苏州215006 

基　　金：上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2005)第3~5号) 上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2006)第5~3号)资助项目 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2008年第28卷第9期

页      码：68-76页

摘      要：利用EL350基因工程菌进行同源重组,成功进行基因敲除已有报道,但利用该系统进行兔次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变和基因打靶方面的研究还没有报道。实验首先在已经筛选到含有兔全长HPRT基因BAC克隆(LBNL1-304M19)的基础上,利用Red重组系统,通过Gap-Repair方式从此克隆上将一段47kb无启动子的HPRT基因组片段(不含有第1个外显子)克隆到pBACLinkSp质粒上,产生pBACLinkSp-rHPRT质粒。然后基于pBACLinkSp-rHPRT质粒,设计不同的同源臂,从而删除了HPRT基因的不同编码区,成功构建了三个不同的HPRT基因打靶载体。同时对利用同源重组技术敲除不同大小的DNA片段的效率进行了研究。基于实验所构建的三个不同的兔HPRT基因打靶载体,为探索兔成纤维细胞和胚胎干细胞基因打靶的适宜条件,及进一步获得兔HPRT基因敲除动物疾病模型奠定了基础。

主 题 词：Red重组 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因 基因敲除 载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20080912

馆 藏 号：203609743...