SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测猪细小病毒方法的建立及初步应用

作     者：沈志强 王金良 郭显坡 王晓虎 汪明 赵德明 SHEN Zhi-qiang;WANG Jin-liang;GUO Xian-po;WANG Xiao-hu;WANG Ming;ZHAO De-ming

作者机构：山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 山东绿都生物科技有限公司山东滨州256600 中国农业大学动物医学院北京100094 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2011年第31卷第1期

页      码：11-15页

摘      要：根据GenBank登录的猪细小病毒株NADL-2(NC001718)的VP2基因序列设计1对特异性引物,经PCR扩增出431bp的目的片段。回收产物与pMD18-T vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经PCR及测序鉴定后,作为标准模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果表明,标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,R2=0.997 6,产物Tm为82.3～82.9℃,检测灵敏度为72.1拷贝/μL,特异性和重复性良好。本试验所建立的检测PPV VP2基因的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,为该病毒的致病机制研究、临床早期诊断及定量分析PPV感染程度奠定了基础。

主 题 词：猪细小病毒 实时荧光定量PCR 检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.01.003

馆 藏 号：203610758...