SET基因shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定

作     者：刘建军 蒋英芝 叶金波 李杰 杨细飞 周丽 黄海燕 黄新凤 LIU Jian-jun;JIANG Ying-zhi;YE Jin-bo;H Jie;YANG Xi-fei;ZHOU Li;HUANG Hai-yan;HUANG Xin-feng

作者机构：深圳市疾病预防控制中心深圳市现代毒理学重点实验室广东深圳518055 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81273126 30972454) 深圳市重点实验室提升发展项目(CXB201005260068A) 

出 版 物：《癌变．畸变．突变》 (Carcinogenesis,Teratogenesis & Mutagenesis)

年 卷 期：2013年第25卷第1期

页      码：44-47,52页

摘      要：目的:构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持。方法:通过NCBI检索SET序列,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector。挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒。将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导入L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western blot鉴定干扰效果。结果:PCR和测序结果证明双链shRNA正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞。结论:利用慢病毒介导的RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞。

主 题 词：SET RNA干扰 慢病毒 载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-616x.2013.01.010

馆 藏 号：203611780...