人巨细胞病毒UL32和UL44融合基因的表达及其抗原性分析

作     者：邓兆享 彭杰雄 孙兴宝 林连成 

作者机构：汕头大学医学院广东汕头515041 武警广东省边防总队医院检验科广东深圳518029 深圳市赛尔生物技术有限公司广东深圳518055 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2014年第14卷第3期

页      码：267-270页

摘      要：目的用聚合酶链式反应(PCR)扩增人巨细胞病毒UL32、UL44截短基因,构建pET-32a-UL32-UL44表达载体,转化宿菌大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,对目的蛋白进行纯化、标记HRP,用于检测IgM抗体。方法根据Gene-bank中HCMV的pp150、pp52蛋白序列,利用Protean计算机软件分析其亲疏水性和抗原性,选取适合的区段,根据其对应的UL32、UL44基因核苷酸序列设计合成引物,PCR扩增目的基因序列,经测序证明无误之后,克隆pET-32a-UL32-UL44重组质粒,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,进行诱导表达,纯化目的蛋白,标记HRP,用ELISA捕获法对目的蛋白-HRP标记物的灵敏性和特异性等指标进行评价。结果成功构建pET-32a-UL32-UL44重组质粒,导入在BL21(DE3)菌株中,经诱导后目的蛋白表达于上清中,经纯化、标记HRP,标记物用于ELISA捕获法能够准确、特异地检测HCMV血清标本,80份血清检测结果显示其灵敏度可达92.5%,特异性达97.5%。结论 HCMV基因工程重组蛋白具有较好的免疫活性,为研制以基因工程重组抗原代替传统全病毒抗原的HCMV检测试剂盒打下了基础。

主 题 词：人巨细胞病毒 截短基因 蛋白纯化 酶联免疫捕获法 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2014.03.008

馆 藏 号：203612315...