磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒构建及体外表达

作     者：秦勇 蔡金华 郑鹤琳 刘官信 王世一 刘波 Qin Yong;Cai Jinhua;Zheng Helin;Liu Guanxin;Wang Shiyi;Liu Bo

作者机构：重庆医科大学附属儿童医院放射科重庆400014 重庆医科大学附属儿童医院儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地重庆400014 

基　　金：重庆市自然科学基金(CSTC2009JJ0305) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2011年第33卷第13期

页      码：1346-1349页

摘      要：目的构建携带磁共振报告基因magA的慢病毒载体质粒,初步检测其体外转铁效应。方法采用人工DNA合成技术合成目的基因magA,DNA重组技术将magA基因连接入慢病毒表达载体质粒pLenti-EGFP,酶切及DNA测序鉴定重组质粒pLenti-EGFP/magA的准确性。包装、包膜及重组质粒共转染293FT细胞包装慢病毒,收集包被magA基因的慢病毒上清并感染293T靶细胞,细胞培养基内加入500μmol/L枸橼酸铁连续4次传代,荧光显微镜观察并提取细胞行台盼蓝排除实验和普鲁士蓝染色,同时设立对照组行同样方法实验。结果酶切和DNA测序分析证实magA基因准确克隆入慢病毒表达载体设计位点,合成目的基因序列与GenBank中magA序列完全一致。荧光显微镜下观察包装细胞293FT细胞质内有大量绿色荧光表达,病毒滴度达到108 Tu/μl。慢病毒感染293T靶细胞后,细胞内稳定表达EGFP,且效率>80%。实验组及对照组台盼蓝拒染率分别为(92.80±2.65)、(93.50±1.29),2组拒染率差异无统计学意义(P>0.05)。普鲁士蓝染色发现实验组细胞内有大量蓝染铁颗粒形成,对照组呈阴性。结论 成功构建了携带磁共振报告基因magA的慢病毒表达载体,证实了magA基因在哺乳动物293T靶细胞内的转铁作用。

主 题 词：magA 报告基因 磁共振成像 慢病毒载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.2011.13.006

馆 藏 号：203617370...