重组人PCNA突变体的克隆与稳定表达

作     者：位全芳 杨劲 曾益军 周虎传 李劲 刘洋 李杰 WEI Quan-fang;YANG Jin;ZENG Yi-jun;ZHOU Hu-chuan;LI Jin;LIU Yang;LI Jie

作者机构：第三军医大学基础部生化与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038 

出 版 物：《现代生物医学进展》 (Progress in Modern Biomedicine)

年 卷 期：2008年第8卷第4期

页      码：653-655,666页

摘      要：目的:构建重组人PCNA突变体(mutant PCNA,mPCNA)的真核表达质粒,并建立稳定高表达该目的蛋白的宫颈癌细胞系Hela,为进一步研究PCNA在DNA损伤修复中重要的生物学功能奠定基础。方法:将含有定点突变的PCNA cDNA序列克隆到T栽体中,然后再亚克隆到真核表达栽体pCDNA3.1/V5-His A上,构建真核表达载体质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA,稳定转染到Hela细胞中;Western B1otting法检测蛋白的表达情况;白细胞记数法测定细胞的生长速率。结果:真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-mPCNA经酶切、测序分析与实验设计的序列完全一致;稳定建系后,Western Blotting结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;稳定高表达mPCNA的细胞系与野生型细胞相比两者的生长速率基本一致。结论:成功构建了真核表达质粒pCD- NA3.1/V5-His A-mPCNA;建立了稳定高表达该突变体的Hela细胞系;PCNA突变体的高表达不影响Hela细胞的正常生长。

主 题 词：增殖细胞核抗原 突变体 稳定转染 Hela细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-6273.2008.04.018

馆 藏 号：203618966...