SYBR GreenⅡ黄芩18S rRNA基因实时荧光定量PCR方法的建立

作     者：王帅 程林 杨利民 韩梅 Wang Shuai;Cheng Lin;Yang Limin;Han Mei

作者机构：吉林农业大学中药材学院长春130118 

基　　金：国家自然科学基金项目(31570327 31070292)资助 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2019年第17卷第6期

页      码：1965-1969页

摘      要：利用SYBR GreenⅡ染料法,建立黄芩实时荧光定量PCR的反应体系。根据18S rRNA基因序列保守性,在18S rRNA基因保守区设计一对特异性引物,以常规PCR产物为标准品,浓度梯度稀释后制定标准曲线,对溶解曲线进行分析,对PCR退火温度,引物浓度,模板浓度等反应条件进行优化。结果表明:在20μL反应体系中,加入10μL SYBR Premix Ex Taq TM时,引物和cDNA最佳加入量分别为0.8μL和1.0μL;最佳反应程序:进行40次循环,95℃预变性30 s,95℃变性5 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s。标准曲线Ct的检测范围在14～29,扩增效率为97.8%;溶解曲线显示为单峰,其Tm为(85±1.0)℃。本研究建立的黄芩18S rRNA基因实时荧光定量PCR法,具有检测范围广,扩增效率高,特异性高等优点,对从分子水平阐明黄芩药效成分合成机制,筛选高产优质的黄芩种质资源具有重要的意义。

主 题 词：黄芩 内参基因 实时荧光定量PCR SYBR GreenⅡ 

学科分类：1008[医学-中药学类] 0710[理学-生物科学类] 07[理学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.017.001965

馆 藏 号：203624764...