大菱鲆(Scophthalmus maximus)蛋白质二硫键异构酶SmPDIA3的表达分析和功能验证

作     者：唐启政 孙志宾 王新安 马爱军 杨双双 黄智慧 TANG Qi-Zheng;SUN Zhi-Bin;WANG Xin-An;MA Ai-Jun;YANG Shuang-Shuang;HUANG Zhi-Hui

作者机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所山东省海洋渔业生物技术与遗传育种重点实验室青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室青岛266071 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室青岛266071 

基　　金：现代农业产业技术体系专项 CARS-47-G01号 青岛海洋科学与技术国家实验室"鳌山人才"培养计划项目 2017ASTCP-OS04号 国家自然科学基金项目 41706168号 山东省重点研发计划 2016GSF115019号 山东省良种工程 2016LZGC031号 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2019年第50卷第2期

页      码：409-419页

摘      要：本研究利用SMART-RACE技术克隆了大菱鲆SmPDIA3基因。SmPDIA3基因cDNA序列全长2083bp,包括1479bp的开放阅读框,编码492个氨基酸, GenBank登录号:MG765516。组织表达分析发现:SmPDIA3基因在肠、鳃、肝脏等组织中均有表达,其中在肝脏中表达量最高,脑中最低。进一步研究了温度胁迫后SmPDIA3基因在肠和肝脏组织中的表达变化规律,发现随着胁迫温度的升高,SmPDIA3基因的相对表达量总体上升,并在28°C时达到最大。利用原核表达技术,构建了pET-28a-PDIA3原核表达载体,IPTG诱导后融合蛋白主要在上清中表达。将上清中的蛋白分离纯化后,利用Westernblot技术验证了目的蛋白的准确性。将纯化后的目的蛋白浓缩后,利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测得蛋白浓度为243.18μg/mL。最后设计变性溶菌酶的复性实验,验证了SmPDIA3蛋白具有分子伴侣功能,能够辅助变性蛋白的正确折叠。

主 题 词：大菱鲆 RACE SmPDIA3 原核表达 分子伴侣 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 071002[071002] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.11693/hyhz20181000247

馆 藏 号：203624955...