拟南芥AtCOR15a抗寒基因原核表达载体的构建及蛋白表达

作     者：李静 李晓荣 王冬梅 郝晓燕 李建平 黄全生 张桦 LI Jing;LI Xiao-rong;WANG Dong-mei;HAO Xiao-yan;LI Jian-pin;HUANG Quan-sheng;ZHANG Hua

作者机构：新疆农业科学院核技术生物技术研究所/新疆农作物生物技术重点实验室乌鲁木齐830091 新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052 

基　　金：新疆维吾尔自治区重大专项(200731138-3) 

出 版 物：《新疆农业科学》 (Xinjiang Agricultural Sciences)

年 卷 期：2010年第47卷第10期

页      码：2031-2036页

摘      要：【目的】通过RT-PCR获得拟南芥AtCOR15a基因的ORF全长,经酶切、连接,以pET-28a（＋）为原核表达载体。构建成pET28a-COR15a的重组表达载体,研究该基因在大肠杆菌中的表达情况,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】根据拟南芥AtCOR15a基因序列设计特异引物,利用RT-PCR的方法扩增目的基因,构建原核表达载体pET28a-COR15a,并将此重组质粒转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,验证其蛋白表达量,并对其体系进行优化。【结果】AtCOR15a在大肠杆菌中成功表达,在37℃条件下诱导表达量最大,而30和16℃条件下蛋白表达量降低,IPTG浓度0.2~1.0 mmol/L对蛋白的表达量影响不大,并没有明显差异。但通过在不同诱导时间取样分析,结果发现加入IPTG后诱导5 h蛋白表达量最大,而8 h后逐渐降低。【结论】构建的原核表达载体在大肠杆菌中能高效表达,AtCOR15a融合蛋白分子量大约为19 kD,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

主 题 词：AtCOR15a 原核表达载体 蛋白表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0828[工学-建筑类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

馆 藏 号：203626133...