家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法及诊断试剂盒

作     者：何永强 吴姗 鲁兴萌 张弘 邱海洪 帅江冰 王素华 张晓峰 徐国群 李光才 董强 HE Yong-Qiang;WU Shan;LU Xing-Meng;ZHANG Hong;QIU Hai-Hong;SHUAI Jiang-Bing;WANG Su-Hua;ZHANG Xiao-Feng;XU Guo-Qun;LI Guang-Cai;DONG Qiang

作者机构：浙江出入境检验检疫局技术中心杭州310012 浙江大学动物科学学院杭州310029 浙江中医药大学第一附属医院杭州310006 

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科研项目(No.2007IK017) 浙江省重大科技专项(No.2010C12005-2) 浙江出入境检验检疫局科技项目(No.ZK200610) 

出 版 物：《蚕业科学》 (ACTA SERICOLOGICA SINICA)

年 卷 期：2011年第37卷第2期

页      码：260-265页

摘      要：基于为蚕种生产与流通贸易提供快速、灵敏、准确检测家蚕微孢子虫的方法,以家蚕微孢子虫小亚单位核糖体RNA基因66 bp片段作为靶标,设计特异性引物和TaqMan探针,用构建的重组质粒制备标准品进行荧光定量PCR扩增,通过优化PCR反应体系,测定线性范围,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,成功构建了家蚕微孢子虫的荧光定量PCR检测方法,并研制出诊断试剂盒。该方法的检测线性范围为1×108～1×102拷贝/mL的7个线性梯度,检测家蚕微孢子虫的敏感度达1×102拷贝/mL,特异性高,3次重复性检测应用试验的批内变异系数为3.6%～7.2%,批间变异系数为5.2%～7.8%。结果表明,建立的家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法具有准确、灵敏、快速、特异性强的特点。

主 题 词：家蚕微孢子虫 荧光定量PCR 诊断试剂盒 

学科分类：0906[农学-水产类] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0257-4799.2011.02.012

馆 藏 号：203626283...