介导EGFR siRNA转染肝癌HepG2细胞的试剂筛选及条件优化

作     者：陈罡 党裔武 罗殿中 CHEN Gang;DANG Yi-wu;LUO Dian-zhong

作者机构：广西医科大学第一附属医院广西南宁530021 

基　　金：广西自然科学基金资助项目(1013059) 

出 版 物：《山东医药》 (Shandong Medical Journal)

年 卷 期：2011年第51卷第18期

页      码：18-20页

摘      要：目的筛选介导表皮生长因子受体(EGFR)小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞的试剂,并优化转染条件。方法设计靶向EGFR的特异性siRNA,分别用Lipofectamine 2000、siPORT Amine、ICAFectin 442、N-TER nanoparticle、X-tremeGENE、polyMagnetofection、combiMAGnetofection介导转染肝癌HepG2细胞48、72 h。实时定量RT-PCR检测HepG2细胞的EGFR mRNA,计算敲除EGFR mRNA率,据此筛选出最佳转染试剂,继续进行不同试剂用量、不同siRNA浓度、正反向转染的对比。测算转染后细胞存活率及转染率。结果 Lipofectamine2000、siPORTAmine及combiMAGnetofection介导转染72 h后,HepG2细胞的EGFR mRNA敲除率均超过65%。2μl的combiMAGnetofection及200 nM的EGFR siRNA组合、72 h时HepG2细胞的EGFR mRNA沉默效率最高(90%±1%),其细胞存活率为94%±8%,转染率超过95%。结论介导EGFR siRNA转染HepG2细胞的最佳试剂是combiMAGnetofection,优化转染条件为2μl的combiMAGnetofection、200 nM的EGFR siRNA、转染72 h。

主 题 词：RNA干扰 表皮生长因子受体 小干扰RNA 基因转染介质 肝癌细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1002-266X.2011.18.011

馆 藏 号：203626366...