猪伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及其冻干检测试剂的制备

作     者：侯月娥 叶平 伍建敏 王凤求 赵玉林 王贵平 李中圣 HOU Yue-e;YE Ping;WU Jian-min;WANG Feng-qiu;ZHAO Yu-lin;WANG Gui-ping;LI Zhong-sheng

作者机构：广东海大畜牧兽医研究院广州511400 桂林联勤保障中心第二储备资产管理局广州510440 

基　　金：广东省科技计划项目(20158020203006) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2019年第27卷第1期

页      码：19-24页

摘      要：猪伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的一种传染病,目前在我国广泛流行。本研究针对GenBank中PRV的gE基因序列进行比较分析,在其保守区设计了特异性探针和PCR引物,通过优化反应条件,建立了可以区别野毒株和基因缺失疫苗株的TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法可特异性地检测出野毒感染,而对基因缺失疫苗株、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无检测信号;对PRV检测的灵敏度可达10个模板拷贝数,是普通PCR的100倍。通过优化的冻干工艺制备出PRV全预混PCR试剂,室温25℃保存3个月或37℃保存15d,敏感性仍为10个拷贝,推测储存于4℃的有效期约为24个月;利用手持单通道荧光PCR仪,可在42 min时间内完成核酸诊断。本研究基于TaqMan荧光定量PCR检测方法,结合核酸扩增体系冻干工艺制备的PRV PCR冻干试剂具有耐保存,便于运输,准确性高等特性,对快速诊断PRV和病毒定量检测具有重要意义。

主 题 词：猪伪狂犬病毒 冻干检测试剂 TaqMan荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203627624...