hVPS4A基因克隆及真核表达载体的构建

作     者：夏剑波 席金瓯 刘贽 王维鹏 Xia Jianbo;Xi Jinou;Liu Zhi;Wang Weipeng

作者机构：湖北省妇幼保健院检验科武汉430070 

出 版 物：《国际检验医学杂志》 (International Journal of Laboratory Medicine)

年 卷 期：2014年第35卷第13期

页      码：1665-1666,1669页

摘      要：目的克隆人细胞空泡蛋白分选因子4A(human vacuolar protein sorting 4A,hVPS4A)基因,构建其真核表达质粒。方法以Huh7细胞cDNA为模板,设计引物扩增全长hVPS4A基因,再将目的基因插入到真核载体pRK5中。重组质粒经PCR、酶切和DNA测序确认。结果从Huh7细胞cDNA中扩增得到约1 350bp大小的目的片段,经回收、纯化、酶切后与载体pRK5连接,转化DH5α大肠杆菌。选择PCR鉴定阳性的重组质粒,经EcoRⅠ单酶切可见约一条5 900bp片段;经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切可得到4 600bp和1 350bp两个片段,分别与载体pRK5和目的片段hVPS4A预期大小一致;DNA测序结果显示插入片段与hVPS4A参考序列一致。结论成功构建了含hVPS4A基因的真核表达载体,为进一步研究hVPS4A的生物学功能提供了条件。

主 题 词：人细胞空泡蛋白分选因子4A 基因克隆 真核表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4130.2014.13.001

馆 藏 号：203628001...