Notch1(NICD)过表达真核载体构建及对大鼠BMSCs增殖分化的影响

作     者：杜红阳 李东宁 付海燕 包翠芬 秦书俭 DU Hongyang;LI Dongning;FU Haiyan;BAO Cuifen;QIN Shujian

作者机构：医学院附属第一医院皮肤科辽宁121001 重症医学科121001 医学院解剖学教研室辽宁121001 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31170930) 辽宁省科技厅自然科学基金计划项目(2013022059) 辽宁医学院青年科技启动基金项目(Y2011Z010) 

出 版 物：《天津医药》 (Tianjin Medical Journal)

年 卷 期：2014年第42卷第9期

页      码：883-888页

摘      要：目的探讨过表达Notch1(NICD)基因对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖分化的影响。方法构建Notch1(NICD)过表达真核载体,实验分正常对照组(CON组,不做转染)、阳性对照组(空载体组,将质粒pEGFP-N1转染BMSCs)和转染组(将重组质粒pEGFP-N1-NICD转染BMSCs)。转染48 h后观察细胞一般状态,Real-timePCR和Western blotting检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Notch1基因和蛋白表达,流式检测转染后细胞凋亡、细胞周期,MTT检测细胞增殖情况。结果重组质粒pEGFP-N1-NICD编码序列与设计完全一致。转染组和空载体组BMSCs均可表达绿色荧光。转染组GFAP、Notch1的基因和蛋白表达均高于CON组和空载体组(均P<0.05),空载体组与CON组差异无统计学意义;各组间NSE的基因和蛋白表达差异无统计学意义。转染组存活细胞比率低于CON组和空载体组,早期细胞凋亡比率、晚期细胞凋亡比率均高于CON组和空载体组;空载体组晚期细胞凋亡比率高于CON组。转染组细胞处于G1/G0期的比例高于CON组和空载体组,处于S期和G2/M期的比例低于CON组和空载体组(均P<0.05)。除转染1 d时各组MTT A490值差异无统计学意义外,其余时点转染组MTT A490值均低于CON组和空载体组(均P<0.05)。结论高表达Notch1(NICD)基因可能在一定程度上诱导BMSCs凋亡、抑制其增殖,且表现诱导向神经胶质样细胞分化。

主 题 词：细胞增殖 细胞分化 转染 神经胶质原纤维酸性蛋白质 磷酸丙酮酸水合酶 Notch信号通路 骨髓间充质干细胞 诱导 Notch1(NICD) 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0253-9896.2014.09.009

馆 藏 号：203628086...