pGPU6/GFP质粒介导的表达钙网织蛋白基因的短发夹RNA的构建和鉴定

作     者：李晓曦 孟凡东 孙大鹏 仇凤启 刘新莉 赵丹 马萍 

作者机构：中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所二室辽宁沈阳110001 

基　　金：辽宁省科学技术计划立项课题(No.2009225008-1) 

出 版 物：《中国老年学杂志》 (Chinese Journal of Gerontology)

年 卷 期：2014年第34卷第13期

页      码：3675-3677页

摘      要：目的构建靶向钙网织蛋白(CRT)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定。方法设计并合成4对针对CRT基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGPU6/GFP连接,构建4个重质粒,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过Western印迹法检测细胞中CRT基因及蛋白的表达水平。结果经酶切鉴定筛出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-CRT构建成功;转染MDA-MB-231细胞后,CRT基因在mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中pGPU6/GFP/CRT1的抑制效果最好。结论成功构建了靶向CRT基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对CRT基因有显著抑制作用的shRNA。

主 题 词：CRT基因 RNA干扰 乳腺癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9202.2014.13.077

馆 藏 号：203629186...