Txnip基因siRNA慢病毒表达质粒构建及促进猪前体脂肪细胞分化

作     者：岳小婧 于淇 张晶 窦晓宁 谢晶宇 郭鹏辉 卢建雄 张国华 YUE Xiao-Jing;YU Qi;ZHANG Jing;DOU Xiao-Ning;XIE Jing-Yu;GUO Peng-Hui;LU Jian-Xiong;ZHANG Guo-Hua

作者机构：西北民族大学生命科学与工程学院兰州730030 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31560639 No.31460589) 国家民委中青年英才计划(98) 西北民族大学"一优三特"生物工程特色学科中央高校基本科研业务费项目(No.31920180125) 西北民族大学研究生科研创新项目(No.Yxm2016137)资助~~ 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2019年第35卷第4期

页      码：457-464页

摘      要：硫氧还蛋白互作蛋白(thioredoxin interacting protein, Txnip)是一种氧化还原调节蛋白质,与硫氧还蛋白结合并抑制其活性,调节细胞氧化还原状态,影响细胞多种生理过程,然而其在猪脂肪细胞分化中的作用尚不明确。本文设计合成3对靶向猪Txnip基因的shRNA寡核苷酸,分别连接于重组慢病毒载体pGLV_3/H_1/GFP+Puro构建siRNA表达质粒。测序验证后,与包装质粒共转染293T细胞,获得滴度1×10~8 pfu/mL的慢病毒干扰质粒。以MOI值100转染原代培养猪前体脂肪细胞,转染率均达80%以上,其中Txnip-shRNA-2转染细胞Txnip基因沉默率达75%。转染Txnip-shRNA-2的猪前体脂肪细胞用成脂分化培养液诱导后,每隔1 d检测细胞成脂分化及相关基因表达。结果发现,其分化比阴性对照质粒转染或未转染细胞显著增强(P<0.05),PPARγ和FAS mRNA表达水平显著提高(P<0.05)。本文构建siRNA慢病毒表达质粒能有效干扰猪Txnip基因表达,Txnip表达沉默可通过上调PPARγ表达促进猪前体脂肪细胞分化。本研究提示,Txnip可能是猪脂肪细胞分化的抑制因子。

主 题 词：硫氧还蛋白互作蛋白 干扰小RNA 猪 前体脂肪细胞 分化 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.04.15

馆 藏 号：203630879...