牛支原体P33蛋白的原核表达及鉴定

作     者：李令臣 吴胜昔 梁望旺 李俊萱 曾政 黄恒 

作者机构：重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 重庆市动物疫病预防控制中心重庆401120 

基　　金：重庆市社会民生科技创新专项(cstc2015shmszx80027 cstc2016shmszx0076) 重庆市巴南区科技计划项目(2017TJ06) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第7期

页      码：81-84页

摘      要：为了实现牛支原体P33蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验在不改变P33蛋白氨基酸序列的情况下,根据GenBank发表的P33基因序列(登录号为AIA33909.1)设计并合成特异性引物,利用PCR法扩增P33基因,进行双酶切并将基因片段克隆到pET28a(+)载体中,构建重组质粒pET28a(+)/P33,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行原核表达,再利用His-tag镍柱纯化P33重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:成功扩增得到牛支原体P33基因,其核苷酸序列长度为710 bp,重组菌株在温度为30℃、以0.5 mmol/L IPTG诱导12小时时,P33蛋白表达量最高;经His-tag镍柱纯化后P33蛋白在33 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中表达牛支原体P33重组蛋白。

主 题 词：牛支原体 P33 蛋白 载体构建 原核表达 重组菌株 蛋白免疫印迹分析 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.02.0059

馆 藏 号：203631453...