Chinese1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的基因克隆表达及生物信息学分析

作     者：唐媛媛 莫绪维 陈鹤 李群 蔡亦红 沈继龙 

作者机构：安徽医科大学基础医学院病原与免疫学实验室安徽合肥230032 安徽省六安市人民医院检验科安徽六安237000 安徽医科大学第一附属医院检验科安徽合肥230022 安徽医科大学公共卫生学院卫生检验检疫系安徽合肥230032 安徽医科大学基础医学院寄生虫学教研室安徽合肥230032 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(No2010CB530001) 国家青年科学基金(No 81101272) 

出 版 物：《安徽医药》 (Anhui Medical and Pharmaceutical Journal)

年 卷 期：2015年第19卷第4期

页      码：675-679页

摘      要：目的构建弓形虫Chinese 1基因型Tg Ct Wh3(以后均简称Wh3)株棒状体蛋白(rhoptry protein,ROPs)16的原核和真核重组表达质粒及其3D结构。方法参照ROP16序列分别设计引物,采用PCR从弓形虫Chinese 1基因型Wh3株基因组DNA中扩增出编码ROP16的基因片段,克隆至p MD18-T载体;经PCR及测序分析鉴定;阳性克隆的质粒分别亚克隆至原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2,分别转化大肠杆菌BL21和DH5α,PCR和酶切鉴定转化菌落插入的序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE和免疫印迹分析融合蛋白的表达;将构建的真核重组质粒经脂质体转染293T细胞,观察其在细胞中表达;采用生物信息学方法分析构建了蛋白的3D结构。结果各组均PCR扩增出约2.1 kb ROP16基因的特异片段,序列检测结果均正确;分别亚克隆到原核表达载体p ET-28a和真核表达载体p EGFP-C2中,成功构建了Chinese 1基因型弓形虫棒状体蛋白ROP16的原核表达质粒和真核表达质粒;原核表达质粒在大肠杆菌中表达了ROP16的融合蛋白;真核表达质粒在293T细胞中成功表达,成功构建出ROP16基因的3D结构图。结论以p ET-28a和p EGFP-C2为载体,分别成功构建并表达了ROP16的原核和真核重组质粒,并构建出其3D结构图。

主 题 词：弓形虫 棒状体蛋白16 克隆 表达 生物信息学分析 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-6469.2015.04.018

馆 藏 号：203632495...