新型鸭呼肠孤病毒可视化检测方法的建立与应用

作     者：蔡跃佳 梁国智 梅敏敏 黄雯晶 李晓文 李文锋 黄淑坚 李智丽 CAI Yuejia;LIANG Guozhi;MEI Minmin;HUANG Wenjing;LI Xiaowen;LI Wenfeng;Huang Shujian;Li Zhili

作者机构：佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528000 

基　　金：2017年"攀登计划"广东省大学生科技创新培育专项(pdjh2017b0534) 广东省教育厅预防兽医学重点实验室项目(2014KTSPT037) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2019年第7期

页      码：71-74,168-169页

摘      要：为了快速检测新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),试验针对NDRV保守序列设计特异性引物,将RT-LAMP技术与荧光染料钙黄绿素结合,建立NDRV钙黄绿素可视化RT-LAMP快速检测方法,并对该方法的反应温度、时间及体系进行优化,检测该方法的特异性和敏感性,同时采集12份临床疑似NDRV感染的病料分别用钙黄绿素可视化RT-LAMP方法和常规RT-PCR方法进行检测,比较两者的阳性检出率。结果表明:成功构建NDRV钙黄绿素可视化RT-LAMP快速检测方法;优化后的反应温度为66℃,反应时间为50 min,反应体系中Mg^(2+)浓度为3.0 mmol/L,甜菜碱浓度为0.5 mmol/L,dNTPs浓度为0.3 mmol/L,Bst DNA聚合酶的浓度为0.32 U/μL,AMV反转录酶的浓度为0.14 U/μL,内外引物浓度比为10∶1,环外引物浓度比为4∶1。该方法可特异性检测出NDRV;对NDRV的最低检测量约为200 fg;用该方法对临床疑似NDRV感染的病料进行检测,阳性率为91.67%,而常规RT-PCR方法阳性率为83.33%,并且钙黄绿素可视化RT-LAMP方法能通过颜色变化观察反应结果。说明试验建立的RT-LAMP检测方法特异性好,敏感性强,读取结果更方便直观。

主 题 词：新型鸭呼肠孤病毒 钙黄绿素可视化技术 环介导等温扩增技术 敏感性 特异性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.01.0195

馆 藏 号：203632601...