中华齿刺甲抗冻蛋白基因的克隆及温度对其表达的影响

作     者：张凤娟 王岩 汪露 李肇阳 陶波林 马纪 ZHANG Fengjuan;WANG Yan;WANG Lu;LI Zhaoyang;TAO Bolin;MA Ji

作者机构：新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 

基　　金：国家大学生创新创业实训项目(XJU-SRT-13165) 

出 版 物：《四川动物》 (Sichuan Journal of Zoology)

年 卷 期：2015年第34卷第4期

页      码：518-523页

摘      要：中华齿刺甲Oodescelis chinensis隶属于鞘翅目拟步甲科,仅分布于我国新疆的荒漠和半荒漠地区,为中国特有种,属于少见的耐冻昆虫。目前尚不清楚中华齿刺甲是否含有抗冻蛋白基因。采用TRIzol法提取中华齿刺甲的总RNA,根据同源序列设计引物,RT-PCR扩增,获得了若干中华齿刺甲抗冻蛋白基因的c DNA(Ocafp)。测序结果表明,Ocafp编码的抗冻蛋白(Oc AFP)序列具有拟步甲科昆虫抗冻蛋白的典型结构特征,即含有数量不等的重复单位:TCTXSXXCXXAX(X代表任意氨基酸),但在保守基序TCT中存在多种不同类型的变异,这种较高的序列变异性可能与中华齿刺甲生活在土壤表层,适应环境温度的较大变化有关。实时荧光定量PCR测定Ocafp在不同温度下的相对表达水平,结果显示,-4℃、5℃、42℃都能诱导Ocafp的上调表达;而40℃则抑制Ocafp的表达。实验结果表明,耐冻昆虫中华齿刺甲也含有抗冻蛋白基因,其编码的氨基酸序列的变异性高于已发表的避冻甲虫的抗冻蛋白。中华齿刺甲抗冻蛋白基因的表达不仅受低温诱导,也受42℃高温诱导,提示Oc AFP可能还具有非抗冻功能。

主 题 词：中华齿刺甲 耐冻昆虫 抗冻蛋白 温度胁迫 实时荧光定量PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.11984/j.issn.1000-7083.2015.04.007

馆 藏 号：203634174...