抗siRNA的GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定细胞系的构建

作     者：李伟 李峰生 于楠 刘萱 李平 江其生 曹诚 LI Wei;LI Feng-Sheng;YU Nan;LIU Xuan;LI Ping;JIANG Qi-Sheng;CAO Cheng

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100850 第二炮兵总医院核与辐射损伤实验室北京100088 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2015年第26卷第2期

页      码：207-210页

摘      要：目的:构建GFP-Plk1同义突变表达载体及其稳定转染细胞系。方法:设计Polo样激酶1(Plk1)si RNA序列及相对应的同义突变引物,并利用二次PCR方法扩增Plk1基因,定向克隆到p Rex-EGFP-IRES-Hygro载体中,构建p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro表达载体;利用逆转录病毒感染的方法,构建He La/GFP-r Plk1稳定细胞系;利用免疫印迹及激光共聚焦显微镜,验证Plk1 si RNA的干扰效果及稳定细胞系的构建。结果:双酶切鉴定和测序结果表明构建的p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro正确;免疫印迹实验证明Plk1 si RNA序列可以有效抑制He La/GFP-r Plk1细胞中内源性Plk1蛋白的表达,但不能干扰掉外源GFP-r Plk1蛋白;在荧光共聚焦显微镜下,观察到有丝分裂的前中期和末期,GFP-r Plk1分别定位于着丝粒和中间体上。结论:构建了Plk1同义突变表达载体p Rex-EGFP-r Plk1-IRES-Hygro和He La/GFP-r Plk1稳定细胞系,为下一步研究Plk1在有丝分裂期的调控机制提供了模型。

主 题 词：Plk1 抗siRNA 同义突变 稳定细胞系 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2015.02.012

馆 藏 号：203634394...