副猪嗜血杆菌重组P2蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立

作     者：李鹏 姜平 李军星 曹珺 张国龙 李玉峰 宋艳华 王先炜 LI Peng;JIANG Ping;LI Jun-xing;CAO Jun;ZHANG Guo-long;LI Yu-feng;SONG Yan-hua;WANG Xian-wei

作者机构：南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 长江大学动物科学学院湖北荆州434025 

基　　金：教育部博士点基金资助项目(20030307012) 教育部优秀青年教师重点资助项目(104101) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2011年第31卷第4期

页      码：480-484,520页

摘      要：根据GenBank中副猪嗜血杆菌(HPS)的P2蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用P2-PCR方法从HB070214株中克隆了1 077bp的P2蛋白基因。将P2蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-P2,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为60 500的可溶性融合蛋白P2-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的30%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达92.5%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗HPS P2蛋白抗体的间接ELISA方法(P2-ELISA),并用所建立的P2-ELISA与国外进口的HPS检测试剂盒Synbiocits-ELISA对196份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为93.4%。结果表明,本试验建立的P2-ELISA与Synbiocits-ELISA具有同样高的特异性。

主 题 词：HPS P2蛋白 原核表达 ELISA 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2011.04.012

馆 藏 号：203635465...