重组表达载体pIRES-CD、pIRES-TK的构建及其在ACC-2细胞中的表达

作     者：黄圣运 张东升 张世周 刘桂军 赵跃然 王来成 刘义庆 HUANG Sheng-yun;ZHANG Dong-sheng;ZHANG Shi-zhou;LIU Gui-jun;ZHAO Yue-ran;WANG Lai-cheng;LIU Yi-qing

作者机构：山东大学山东省立医院口腔颌面外科山东济南250021 山东大学山东省立医院科研中心山东济南250021 

基　　金：山东省自然科学基金资助课题(Z2003C03) 

出 版 物：《山东大学学报（医学版）》 (Journal of Shandong University:Health Sciences)

年 卷 期：2007年第45卷第2期

页      码：117-123页

摘      要：目的:运用分子生物学技术扩增CD、TK基因,进行其DNA序列分析,并构建真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,将其共同转染ACC-2细胞,为进一步研究双自杀基因对ACC-2细胞杀伤作用奠定基础。方法:根据CD和TK基因DNA的序列分别设计、合成引物,构建克隆载体pMD18-T-CD和pMD18-T-TK,并进行DNA序列分析;构建以内部核糖体进入位点(IRES)相连的CD和TK基因的真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,用电穿孔法以真核表达质粒共同转染ACC-2细胞,用RT-PCR检测CD和TK的表达。结果:克隆DNA片段和GeneBank上报道的CD、TK序列基本一致,且经酶切鉴定,CD、TK基因成功插入真核表达质粒IRES,RT-PCR检测表明,以真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK共同转染的ACC-2细胞能表达CD和TK。结论:成功扩增了CD、TK的DNA片段,并进行了序列分析;成功构建CD和TK基因的重组真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,将其转染ACC-2细胞后能分泌性表达CD和TK,为肿瘤基因治疗的研究提供一定途径。

主 题 词：胞嘧啶脱氨酶基因 胸腺嘧啶核苷激酶 内部核糖体进入位点 核酸内切酶 腺样囊性癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671-7554.2007.02.003

馆 藏 号：203640115...