布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶在大肠杆菌中的克隆、表达、纯化及活性测定

作     者：姚璎 杲光伟 李大伟 Ying Yao, Guangwei Gao, and Dawei Li School of Pharmacy, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China

作者机构：上海交通大学药学院上海200240 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2010年第26卷第1期

页      码：130-135页

摘      要：苯丙氨酰-tRNA合成酶是布氏锥虫蛋白合成过程中的一类重要酶,以其为靶点的抑制剂可能发展成为新一代的抗锥虫药物,但此前并没有分离锥虫苯丙氨酸-tRNA合成酶的报道。本研究用大肠杆菌成功克隆表达并纯化了布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶并进行了活性测定。首先通过PCR方法从布氏锥虫细胞基因组中分别扩增出苯丙氨酰-tRNA合成酶的α亚基、β亚基的基因,依次克隆入pCOLADuet共表达载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)RIPL中进行了成功表达,并采用Ni-Bind亲和层析对其进行了纯化,最后用免疫印迹进行了鉴定。此外还采用放射性同位素方法进行了酶活性测定,这为下一步进行布氏锥虫苯丙氨酰-tRNA合成酶抑制物的设计和体外筛选奠定了良好的基础。

主 题 词：布氏锥虫 苯丙氨酰 tRNA合成酶 原核表达 纯化 酶活测定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 0836[0836] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.2010.01.015

馆 藏 号：203641231...