靶向HIV-1细胞受体基因CCR5的人工miRNA的构建与鉴定

作     者：王颖彬 程通 魏丽华 张涛 梁露萍 夏宁邵 WANG Ying-bin;CHENG Tong;WEI Li-hua;ZHANG Tao;LIANG Lu-ping;XIA Ning-shao

作者机构：厦门大学生命科学学院国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心福建厦门361005 

基　　金：“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项课题:“艾滋病毒诊断技术研究与产品研制”(2008ZX10001-013) 教育部科学技术研究重大项目培育基金(705031) 福建省自然科学基金计划资助项目(C0710041) 福建省科技重大专项(2004YZ01) 

出 版 物：《厦门大学学报（自然科学版）》 (Journal of Xiamen University：Natural Science)

年 卷 期：2010年第49卷第3期

页      码：410-416页

摘      要：趋化因子CCR5是HIV-1入侵机体细胞的主要辅助受体之一,通过抑制CCR5的表达可以在一定程度上阻断HIV-1的复制进程.miRNA介导的RNA干扰相比经典的siRNA在应用中具有更多的特点.本研究的目的是构建可特异有效靶向CCR5的人工miRNA元件.本研究以CCR5基因序列为模板设计了14个miRNA靶序列,以天然miR-30a为基础骨架通过靶序列区替换构建人工miRNA元件.通过将miRNA表达质粒与携带靶序列区的报告质粒的共转染抑制实验检测不同miRNA的抑制效率,结果显示miCCR-13A具有较好的抑制效率和特异性.进一步将miCCR-13A表达载体转染CCR5阳性的HIV-1受体细胞株TZM-b1,RT-PCR检测显示miCCR-13A可在细胞中获得有效表达,同时应用免疫流式细胞术检测显示在miCCR-13A转染细胞相比对照细胞的CCR5蛋白的检测活性明显降低.进一步的研究显示miCCR-13A在细胞中不会影响细胞活性和干扰素效应相关基因osa1和stat1 mRNA水平,具有良好的特异性.本研究获得的可特异靶向CCR5的人工miRNA元件可为进一步的抗HIV-1研究提供重要基础.

主 题 词：CCR5 RNA干扰 人工miRNA 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203641354...