2012年发现的新冠状病毒分子检测方法的建立与探针优化

作     者：周为民 陆柔剑 耿合员 李辉 段希洁 杨扬 谭文杰 ZHOU Wei-min;LU Rou-jian;GONG He-yuan;LI Hui;DUAN Xi-jie;YANG Yang;TAN Wen-jie

作者机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京102206 上海辉睿生物科技有限公司 

基　　金：基金项目:“十二五”传染病重大专项(2011ZXl0004-001) 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2012年第26卷第6期

页      码：401-404页

摘      要：目的建立2012年确定的新冠状病毒的分子检测方法，并筛选优化引物与探针。方法依据最先发表的208bp长的新冠状病毒1b片段核酸序列，比对分析后设计合成常规RT—PCR引物1对及荧光定量RT—PCR引物1对与TaqMan探针2条（TZl，TZ2），同时合成锁核酸修饰的TaqMan探针2条（LNA-TZl，LNA-TZ2）。建立检测新冠状病毒感染的常规RT—PCR方法与4种荧光定量RT—PCR，分析比较其灵敏度与特异性，同时参照欧洲发表的2种荧光定量RT—PCR引物与探针对（upE，ORFlb）建立相应方法，以合成的阳性模板比较6对荧光定量RT—PCR引物与探针的检出灵敏度。结果所合成的常规RT—PCR与荧光定量RT—PCR引物与探针皆有较好特异性，不能扩增其他人冠状病毒模板及常见呼吸道病毒模板，检出下限达50～500拷贝／反应。锁核酸修饰TaqMan探针可改善荧光定量PCR检测方法的反应性能，经锁核酸修饰的TaqMan探针与常规TaqMan探针相比，检出率提高10倍左右，其中LNA—TZl与upE探针对具最佳反应性能。结论本研究所建立的常规RT—PCR与荧光定量RT—PCR可用于新冠状病毒的分子检测，并推荐使用LNA—TZl与upE探针对。本研究为新冠状病毒分子检测方法应用与改进奠定了基础。

主 题 词：冠状病毒属 分子诊断技术 核酸类 

学科分类：10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2012.06.001

馆 藏 号：203642603...