荧光探针法检测Leber遗传性视神经病变11778位点突变的研究

作     者：张艳敏 宋丹 安慧娟 陈慷 王志立 鲍玉洲 赵朝霞 SONG Dan;AN Hui-juan;CHEN Kang;WANG Zhi-li;BAO Yu-zhou;ZHAO Zhao-xia

作者机构：河南省眼科研究所河南省立眼科医院(张艳敏现在河南省中医院检验科)郑州450003 

基　　金：河南省重点科技攻关计划项目(112102310004) 

出 版 物：《中华实验眼科杂志》 (Chinese Journal Of Experimental Ophthalmology)

年 卷 期：2013年第31卷第2期

页      码：164-167页

摘      要：背景Leber遗传性视神经病变（LHON）与视神经炎的病因和治疗方法均不相同，但由于其临床表现相似，因此易被误诊。利用实时荧光定量PCR技术建立一种高通量、简便、快速、特异性高的LHON检测方法具有重要的临床意义。目的建立以实时荧光定量突变特异性Taqman探针技术检测LHON线粒体DNA（mtDNA）11778G〉A突变的方法，实现快速、简便、准确地筛查mtDNA11778位点突变LHON患者。方法根据mtDNA全基因组序列设计针对mtDNA11778G〉A突变的特异性Taqman探针和引物，从河南省眼科研究所分子生物室LHONDNA库任意选取标本84份，另抽取40名18～20岁健康体检者的血样40份作为正常对照，分别用实时荧光定量特异性探针法和序列测定法检测LHONmtDNA11778G〉A突变，并对检测方法进行可靠性验证。结果用实时荧光定量Taqman探针法检测mtDNA11778G〉A突变，84例视神经病变患者中发现mtDNA11778G〉A突变者23例，阴性结果者61例，23例阳性患者样本扩增曲线结果显示ct值为22．993±0．708，正常对照组样本ct值均为0，与直接测序法检测结果完全相符，其符合率为100％，未发现假阳性和假阴性结果者。结论用实时荧光定量突变特异性Taqman探针法检测LHONmtDNA11778G〉A突变位点的方法简单、省时、准确、直观、特异性强、敏感度高，适用于对LHONmtDNA11778G〉A突变的大规模筛查或预防性检查。

主 题 词：Leber遗传性视神经病变 线粒体DNA 实时荧光定量PCR 点突变 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100212[100212] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2013.02.014

馆 藏 号：203642624...