磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因在乳酸乳球菌中的异源表达

作     者：汤先泽 刘伟 皮雄娥 尹业师 王欣 刘新利 TANG Xian-ze;LIU Wei;PI Xiong-e;YIN Ye-shi;WANG Xin;LIU Xin-li

作者机构：齐鲁工业大学生物工程学院山东济南250353 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所浙江杭州310021 

基　　金：国家"973"计划子课题项目(2012CB721006) 浙江省农业科学院青年人才培养项目 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2016年第28卷第4期

页      码：640-646页

摘      要：根据乳酸乳球菌密码子的偏好性,在不改变编码蛋白的基础上,优化设计并合成枯草芽孢杆菌磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C基因,将其与大肠埃希菌-乳酸乳球菌穿梭质粒p AMJ399连接,构建重组质粒p AMJ399-PIPLC,并电转化至乳酸乳球菌中进行诱导表达。SDS-PAGE分析显示:重组蛋白以可溶性蛋白的形式分泌于胞外,分子质量约35 ku,与预期蛋白大小一致。重组蛋白在PI-李斯特氏菌显色平板上显现明显的乳白色晕圈,证明重组蛋白具有酶活性,磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI-PLC)在重组乳酸乳球菌中成功获得表达。通过优化培养条件,以2%转接量,在含有1%红霉素抗性的GM17液体培养基中,于32℃静止培养24 h,测得培养基上清液中PI-PLC的浓度为1.092μg·m L-1。

主 题 词：磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C 克隆表达 乳酸乳球菌 GPI锚定蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 071005[071005] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-1524.2016.04.15

馆 藏 号：203644139...